新品上市—SAlexa Fluor熒光素抗體標(biāo)記試劑盒

更新時(shí)間：2023-07-04

點(diǎn)擊次數(shù)：1229

熒光標(biāo)記所依賴的化合物稱為熒光物質(zhì)。熒光物質(zhì)是指具有共軛雙鍵化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物，當(dāng)受到某一波段光照射時(shí)激發(fā)成為激發(fā)態(tài)，當(dāng)從激發(fā)態(tài)恢復(fù)基態(tài)時(shí)可發(fā)出熒光。熒光標(biāo)記技術(shù)是將熒光物質(zhì)共價(jià)結(jié)合或物理吸附在所要研究分子的某個(gè)基團(tuán)上，利用它的熒光特性來(lái)提供被研究對(duì)象的信息。熒光標(biāo)記具有的無(wú)放射物污染、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，使其在許多研究領(lǐng)域的應(yīng)用日趨廣泛，如免疫病理、細(xì)胞化學(xué)、流式細(xì)胞學(xué)。

索萊寶SAlexa Fluor熒光素抗體標(biāo)記試劑盒中的SAlexa Fluor熒光素連接有N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）酯，NHS酯可以和伯胺反應(yīng)，形成穩(wěn)定的共價(jià)酰胺鍵并釋放出NHS基團(tuán)。一般一個(gè)IgG分子結(jié)合2~8個(gè)SAlexa Fluor熒光素分子可達(dá)到良好的熒光標(biāo)記效果。

產(chǎn)品信息

試劑盒組分

組分	數(shù)量
SAlexa Fluor熒光素	1
pH調(diào)整緩沖液(0.1mL)	1
1*PBS(1mL)	2
DMSO(0.1mL)	1
純化柱	2
收集管	2

試劑盒規(guī)格

一個(gè)試劑盒可標(biāo)記100μg~2mg抗體

使用說明

抗體準(zhǔn)備

建議抗體濃度調(diào)整到1~2mg/mL。

使用本試劑盒標(biāo)記的抗體溶液，pH在6.5~8.5為宜，最好為PBS緩沖液。緩沖液中不應(yīng)當(dāng)含有BSA等蛋白，也不應(yīng)當(dāng)含有甘氨酸或Tris等含有游離氨基的鹽類，否則可能會(huì)影響標(biāo)記效果。

抗體標(biāo)記

取出SAlexa Fluor染料離心數(shù)秒，將管中干粉甩至管底。注：未離心前請(qǐng)勿開蓋，以免造成損失。

SAlexa Fluor管中加入40mL DMSO用漩渦混勻儀混勻10~20s，至SAlexa Fluor全部溶解，瞬離5~10s，使溶解后的SAlexa Fluor溶液離心至管底。

抗體中加入1/10體積的調(diào)整緩沖液。

將溶解后的SAlexa Fluor加入抗體中(每0.1mg抗體中加入2mLSAlexa Fluor)，用移液槍反復(fù)吹打混勻或用漩渦混勻儀混勻10~20s。

將抗體與SAlexa Fluor混合物置水平搖床或旋轉(zhuǎn)混勻儀，在搖動(dòng)狀態(tài)下室溫避光反應(yīng)1~2小時(shí)。

游離SAlexa Fluor染料的去除

將純化柱下方堵頭掰斷，1000×g離心1 min倒掉保護(hù)液，將純化柱移至新的收集管中。

將0.2 mL PBS加入管中，待全部滲入填料后，1000×g離心1min，重復(fù)2次。

將標(biāo)記反應(yīng)液加入到純化柱填料表面。如果樣品體積小于50mL，用試劑盒中的PBS補(bǔ)齊至50mL。上樣體積最大不要超過200mL。

待樣品滲入填料后，1000×g離心2min，收集純化的蛋白溶液。

將抗體標(biāo)記物4℃避光保存待用。

標(biāo)記抗體保存

標(biāo)記抗體可4℃避光保存，也可以根據(jù)需要選擇加入BSA、防腐劑、甘油等成分保證產(chǎn)品穩(wěn)定。

*推薦保存液：0.01M PBS(pH7.4) 含1%BSA,0.03%

Proclin300和50%甘油，可-20℃保存一年。

染料-蛋白質(zhì)比率的計(jì)算

用PBS稀釋少量標(biāo)記蛋白。

使用路徑長(zhǎng)度為1cm的比色皿，在280nm處測(cè)量吸光度和特定染料的Amax（見附表）

計(jì)算蛋白質(zhì)濃度

C(mg/mL)={[A280-(Amax× Cf)]/1.4}×稀釋因子。

√C是染料-蛋白共軛物濃度；

√A280和Amax分別是在280nm處的吸光值以及在Amax波長(zhǎng)處的吸光值；

√Cf是染料校正因子見附表；

√稀釋因子是在光度測(cè)量時(shí)的稀釋倍數(shù)

計(jì)算標(biāo)記率的方法如下

DOL=(Amax×Mwt×稀釋因子）/(ε×C)

√C是染料-蛋白共軛物濃度；

√Mwt是IgG的分子量；

√ε是染料的摩爾吸光系數(shù)見附表。

注意事項(xiàng)

1. NHS酯類染料對(duì)水分敏感，SAlexa Fluor需現(xiàn)用現(xiàn)配；

2. 低濃度的疊氮鈉（0.02%）和10%甘油不會(huì)明顯干擾蛋白質(zhì)的標(biāo)記。但含有氨基的溶液及大于10%甘油對(duì)抗體的標(biāo)記效率有較大影響。標(biāo)記前應(yīng)盡量去除干凈；

3. 試劑盒組份在運(yùn)輸過程中可能造成顛倒，會(huì)使液體或干粉試劑沾到管壁或瓶蓋上。使用前請(qǐng)離心處理，以使附著管壁或瓶蓋的液體或干粉試劑沉積到管底；

4. DMSO屬微毒類，對(duì)人體皮膚有滲透性，眼有刺激作用，使用時(shí)避免與皮膚，眼睛和黏膜接觸。

附表

*：以nm為單位的激發(fā)波長(zhǎng)

ε：Amax時(shí)的摩爾消光系數(shù)(M^-1 cm^-1)

Cf：校正系數(shù)(A280/Amax)

相關(guān)產(chǎn)品

貨號(hào)	名稱
SALK0001	SAlexa Fluor350 抗體標(biāo)記試劑盒
SALK0002	SAlexa Fluor405 抗體標(biāo)記試劑盒
SALK0003	SAlexa Fluor488 抗體標(biāo)記試劑盒
SALK0004	SAlexa Fluor532 抗體標(biāo)記試劑盒
SALK0005	SAlexa Fluor555 抗體標(biāo)記試劑盒
SALK0006	SAlexa Fluor568 抗體標(biāo)記試劑盒
SALK0007	SAlexa Fluor594 抗體標(biāo)記試劑盒
SALK0008	SAlexa Fluor633 抗體標(biāo)記試劑盒
SALK0009	SAlexa Fluor640 抗體標(biāo)記試劑盒
SALK0010	SAlexa Fluor647 抗體標(biāo)記試劑盒
SALK0011	SAlexa Fluor660 抗體標(biāo)記試劑盒
SALK0012	SAlexa Fluor680 抗體標(biāo)記試劑盒
SALK0013	SAlexa Fluor750 抗體標(biāo)記試劑盒